反相填料常是以硅膠為基礎，表面鍵合有極性相對較弱的官能團的鍵合相。 反相色譜所使用的流動相極性較強，通常為水，緩沖液與甲醇，已腈等混合物。 樣品流出色譜柱的順序是極性較強組合先被沖出，而極性弱的組份會在色譜柱上有 更強的保留。 常用的反相填料有YMC C18填料(ODS)，C8(MOS)，C4(B)，C6H5(Phenyl)等。

　　聚合物調料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等，其主要優點是在PH值為1～ 14均可使用。 相對與硅膠基質的YMC C18填料，這類填料具有更強的疏水性;大孔的聚合物填料對蛋白 質等樣品的分離非常有效。 現在的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質填料，色譜柱柱效較低。

　　反相填料在干燥狀態下為透明無孔凝膠，但是通過有機溶劑溶脹后可以變成具有分子篩性能的多孔網狀結構，凝膠填料*溶脹后，孔徑和排阻極限由交聯度和洗脫劑決定。可以在苯、甲苯、二甲苯、二氯甲烷、四氯化碳、二甲基甲酰胺酮及混合有機溶劑中溶脹分離。可用于親脂性多聚物和有機洗脫溶質的分子量、結構類似物體積排阻層析，也可以分析分子體積不同、具有相同化學性質的高分子同系物。

　　反相填料性能：

　　1、高機械強度聚合物基質實現高通量純化

　　2、高流速下維持高吸附容量及高分離度

　　3、適用于中期純化（intermediate step）和終產品（polishing step）純化

　　4、強陰離子型（Q）和強陽離子型（S）供選擇

　　5、粒徑30m（用于工業化生產）和10?m（用于高分離度純化）供選擇